MİKROORGANİZMA EKİM YÖNTEMLERİ ve SAYIMI: Tanım: Gıda maddesi üzerinde bulunan mikroorganizmaların sayılarının belirlenmesi amacıyla yapılan ekim işlemidir.
Gıda Bilimi ve Endüstrisi ile İlişkisi: Bir gıda maddesinde
mikroorganizma sayısı belirlenerek o gıdanın gıda tüzüğünde belirtilen
değerlere uygunluğunun saptanarak, sağlıklı olup olmadığı belirlenir.
Gıda Örneklerinde Toplam Bakteri Sayımı:
Özet:
Bu yöntem fermente gıdalar gibi doğal niteliği yönünden yüksek sayıda
mikroorganizma içerenler dışında bir çok gıdada kalite kriteri olarak
kullanılır. Yöntemlerde belirtilen besi ortamlarına ekilen gıda örneği
seyreltimleri belli süre ve sıcaklıkda, aerobik koşullarda inkübe
edilir. Toplam bakteri sayımında, dökme ve yayma plak teknikleri gibi
kültürel sayım yöntemleri kullanılır.
1. Dökme Plak Yöntemiyle Toplam Bakteri Sayımı:
Materyal:
· Mikroskop
· Otoklav
· Etüv(220°C’ye kadar ayarlanabilir)
· Su banyoları
· Stomacher veya blender
· Bunzen beki
· Steril pens
· Tüp karıştırıcı
· Steril drigaski , özeler
· Cam veya plastik steril petriler
· Steril pipetler
· Deney tüpleri ve tüp taşıyıcıları
· Erlen, beher
· Plate Count Agar(PCA),EMB
· Mercimek
Metot:
Ø 10g gıda maddesi tartılır ve 90ml fizyolojik su içine konur. Bu
karışım stomacher’de homojenize edilir. Bu dilisyon –1 dilisyonudur.
Ø –1 dilisyonundan 1ml alınır ve içinde 9 mlt fizyolojik su bulunan deney tüpüne aktarılır. Bu –2 dilisyonudur.
Ø –2 dilisyonundan 1 ml alınarak içinde 9 ml fizyolojik su bulunan deney tüpüne aktarılır. Bu –3 dilisyonudur.
Ø Üzerlerine seyreltim değerleri yazılmış petri kutularına –1,-2,-3
dilisyonlarından 1’er ml konulur. Petriler üzerindeki numaralar
seyreltim numaraları ile aynı olmalıdır.
Ø Agarlı besi ortamı kaynar su banyosunda 45°C’ye kadar soğutulur. Her petriye 15-20 ml besi yeri dökülür.
Ø Petrilere hafif salınım hareketi verilerek örnek ile besi yerinim karışması sağlanır.
Ø Besi ortamı katılaştıktan sonra petriler ters çevrilerek 25°C’ de 24-48 saat inkübe edilir.
Kullanılan Çözeltiler:
Plate Count Agar (PCA):
Trypton 5 gr
Yeast agar 2,5 gr
Glukose 1 gr
Agar 15 gr
Destile su 1 lt
Eosin Methylen Blue Agar (EMB):
Pepton 10 gr
Laktoz 10 gr
K2HPO4 2 gr
Agar 15 gr
Eosın Y 0,4 gr
Methylen Blue 0,065gr
Destile su 1 lt
2. Yayma Plak Yöntemiyle Toplam Bakteri Sayımı:
Materyal:
Gerekli cihaz ve malzemeler dökme plak yönteminde anlatıldığı gibidir.
Yalnız burada besi yeri olarak DRBC agar kullanılır. Bu besi yeri ile
küfler sayılır.
Metot:
Ø –1,-2,-3 dilisyonları daha önce anlatıldığı gibi hazırlanır.
Ø Boş petrilere 15-20 mlt besi yeri dökülür. Besi yerinin donması
beklenir ve üzerine her dilisyondan 0,1 er mlt pipetle aktarılır.
Ø Petrilere 0,1 er mlt örnek koyulduğu için bir kez daha seyreltim
yapılmış gibi sayılır ve petrilere koyulan seyreltim derecesinden bir
düşük sayı ile numaralandırılır:-1
-2
Ø Koyduğumuz örnekleri drigaski ile agarın yüzeyine yayarız.
Ø 25°C de 5-7 gün inkübe edilir.